細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK細胞)因具有體外增殖倍數高、抗瘤譜廣、殺瘤活性強、副作用極小等特點而受到關注。研究表明，CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷作用是LAK細胞的10倍。

　　據武漢腫瘤醫院專家介紹，CIK細胞免疫治療是腫瘤治療中的一項新技術，目前已逐步在臨床上應用，因此，制訂科學、嚴格的技術規范對該技術的正確使用及推廣意義重大。

　　但迄今國內還沒有關于CIK細胞培養和臨床應用的統一技術規范。武漢腫瘤醫院生物治療中心參考國家食品藥品監督管理局199年制訂的《新生物制品審批辦法》和美國FDA1998年制訂的《人體細胞治療和基因治療指導原則》，結合數年的CIK細胞臨床應用經驗，制訂出我們的CIK細胞臨床應用技術規范，現介紹如下，供同行切磋和討論，以期促成國內性統一技術規范的早日制定。

　　一、CIK細胞培養條件

　　1、細胞培養場地

　　符合國家GMP標準實驗室，采用彩綱板框架，自流平地面，保持符合實驗室要求的恒定溫度和濕度。細胞培養場地應定期清潔和消毒。

　　2、主要材料與試劑

　　細胞培養應該用無血清培養基，其他細胞活化因子采用國內外正式廠家生產的產品，藥品應有國藥準字文號。每批新的試劑都應該進行無菌試驗及活性測定。一次性使用的物品不得重復使用。

　　3、消毒

　　實驗器械、用品，凡能干烤的，應在180℃烤Zh(或20℃lh)，其他物品用高壓蒸汽消毒。

　　二、CIK細胞制備

　　1、細胞供體(培養用單個核細胞來源)自體細胞:采集患者自體外周血中的單個核細胞。自體細胞的優點是可以避免交叉感染。同種異體細胞:細胞來源必須是當地中心血站采集的符合獻血條件的健康獻血員細胞。一些中、晚期腫瘤患者或接受放、化療后的患者，由于機體免疫功能低下，外周血中的單個核細胞無法進行擴增，因此可用同種異體細胞進行培養。有些學者認為，腫瘤患者存在免疫耐受，自體來源的CIK細胞無法打破免疫耐受，發揮有效殺瘤功能，建議應用異體來源的 CIK細胞進行治療。

　　2、CIK細胞培養

　　①CIK細胞培養方法：目前主要參照美國斯坦福大學骨髓移植中心建立的cIK細胞培養方法:第0天加入IFN一丫50()U/Inl，置37℃、5%CO2孵箱中培養24h，第1天加入幾一230UZ創，cD3longlml，幾一lloUlml繼續培養，每天觀察細胞生長并根據情況進行擴增。

　　②CIK細胞培養時間：培養10d后細胞就表現出殺瘤活性，巧一20d達到高峰，因此臨床用CIK細胞應在培養后的10一20d內收獲。

　　③CIK細胞的形態及表面標記：在顯微鏡下細胞呈圓形，體積增大，胞質飽滿，折光性好，有顆粒，核增大，細胞表面有很多突起和偽足。流式細胞儀檢測發現 CD3+CD56一及CD3+CD56+細胞增多。有報道，CIK細胞的殺傷活性主要來自CD3+cD56十雙陽性細胞。

　　⑤CIK細胞殺傷活性檢測：采用唾哇藍(MTT)法或乳酸脫氫酶(LDH)釋放法測定殺傷活性，當蜘靶比為20:1時，應保證C仄細胞對自然殺傷細胞(NK)敏感腫瘤株K562細胞的殺傷率大于50%，對NK不敏感腫瘤株網1細胞的殺傷率大于30%。

　　⑥CIK細胞質檢：CIK細胞質檢包括無菌檢測(需氧菌檢測，厭氧菌檢測，真菌檢測，支原體檢測)、細胞活率檢測和熱源檢測。

　　⑦CIK細胞收獲：培養終止后離心棄上清液，用生理鹽水洗滌細胞2次以上，重新混勻，懸于10一Zonil輸注用生理鹽水中。