【摘要】 目的 觀察柴紅丸對實驗性黃褐斑模型小鼠的肝臟和皮膚中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影響。方法 除空白對照組動物外，其余動物采用肌肉注射黃體酮并紫外線照射法致黃褐斑實驗動物模型。動物分組，分別按劑量灌胃給藥30天后，處死動物并分別取肝臟和背部皮膚各一塊，生理鹽水制成10%的組織勻漿液，離心，取上清液，檢測各組小鼠肝臟和皮膚中SOD活性和MDA含量。結(jié)果 柴紅丸高、中劑量能明顯升高黃褐斑模型動物的肝臟和皮膚中SOD活性(P<0.01)、降低MDA含量(P<0.01);柴紅丸低劑量亦能明顯升高黃褐斑模型動物皮膚中SOD活性(P<0.01)、降低肝臟和皮膚中MDA含量(P<0.01)。結(jié)論 柴紅丸對實驗性黃褐斑模型小鼠有較好的治療作用，其機制可能與升高抗氧化酶活性、降低過氧化物含量有關。

　　【關鍵詞】柴紅丸;黃褐斑;小鼠

　　柴紅丸是我院于80年代在逍遙丸的基礎上，結(jié)合了本地具體情況和多年臨床實踐加減而成的用于治療黃褐斑的經(jīng)驗方，具有疏肝活血、化瘀消斑的功能，經(jīng)過多年臨床實踐經(jīng)驗，療效確切。為**其治療黃褐斑的現(xiàn)代藥理機制，我們采用局部紫外線照射并肌肉注射黃體酮的方法，觀察柴紅丸對小鼠肝臟和皮膚SOD活性、MDA含量的影響，為其臨床應用提供藥理學實驗依據(jù)。

　　1. 材料與方法

　　1.1 實驗動物 SPF級NIH小鼠，60只，雌性，廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，實驗設施合格證號和動物合格證號分別為SCXK(粵)2003-0002和粵監(jiān)證字2007A021。實驗于廣東省中醫(yī)研究所SPF級動物實驗室完成，其實驗室設施使用許可證號：SYXK(粵)2005-059。

　　1.2實驗藥材及試劑 柴紅丸，中藥配方丸劑，由汕頭市皮膚醫(yī)院制劑室提供，批號：20081216。百消丹(何首烏、枸杞子、當歸、桑葚、蘆薈素等組成，具有祛斑防皺、美容養(yǎng)顏、調(diào)和氣血的功能)，鄭州中奧生物技術有限公司，批號：20081008。黃體酮注射液，上海通用藥業(yè)股份有限公司，051003;丙二醛(MDA)測試盒，南京建成生物工程研究所，20080708;超氧化物歧化酶(SOD)測試盒, 南京建成生物工程研究所，20080708。

　　1.3 儀器 紫外線照射燈(UVB);JJ-1型組織研磨器，深圳天南海北實業(yè)有限公司;721分光光度計，上海精密儀器廠。

　　1.4 方法

　　1.4.1 統(tǒng)計學方法

　　所有計量資料以均值加減標準差( )表示，多組間均數(shù)的比較先采用單因素方差分析(One-Way ANOVA);方差齊時，組間均數(shù)兩兩比較用SNK法;方差不齊時，組間均數(shù)兩兩比較用Dunnett’s T3法。由SPSSl5.0軟件完成，α=0.05。

　　1.4.2 動物試驗

　　1.4.2.1 劑量設置 以藥品說明書標示臨床日用量作為基礎，參考《中藥藥理研究方法學》中劑量換算方法“體表面積比”換算動物試驗劑量作為臨床等效劑量。百消丹小鼠劑量為1.82 g/kg。柴紅丸高劑量小鼠給藥量為6.24 g/kg，中劑量為3.12 g/kg，低劑量為1.56 g/kg(相當于分別為4倍臨床等效劑量、2倍臨床等效劑量、臨床等效劑量)。

　　1.4.2.2 測定方法

　　取60只SPF級NIH雌性小鼠，體重18～22g，適應環(huán)境后，按體重隨即均分為空白對照組，模型對照組，百消丹組，柴紅丸高、中、低劑量組，每組10只。分組后，分別灌胃給藥，同時按照以下步驟處理[1，2，3]：

　　(1)、除空白對照組外其余各組小鼠均后腿肌肉(兩腿交替)注射黃體酮注射液，20 mg/kg，5 ml/kg體重，即相當于人臨床等效劑量的8倍的劑量;空白對照組小鼠肌肉注射同劑量的滅菌注射用水;每周注射6次，連續(xù)30 d。

　　(2)、用8% Na2S水溶液小鼠背部皮膚褪毛后，以波長為320 nm的中波紫外線(UVB)照射小鼠，每日1次，每次照射約20 min，連續(xù)照射30 d。

　　(3)、各給藥組動物分別按劑量灌胃給藥，20 ml/kg，每天1次，連續(xù)30 d。

　　在試驗的第30d，末次給藥1 h后，頸椎脫臼處死小鼠，取肝臟及背部已褪毛皮膚各一塊。用預冷生理鹽水(4℃)沖洗，除凈血液等雜質(zhì)，濾紙拭干，切取皮膚、肝臟各約0.5 g，手術剪剪碎，用組織研磨器勻漿，以1:9(W/V)加入冰生理鹽水，制成10%組織勻漿。勻漿液以3500 r/min離心15 min，取上清液在721分光光度計上測定SOD、MDA的OD值，計算其含量。比較各組差異。

　　2. 結(jié)果

　　2.1 柴紅丸對小鼠SOD活性的影響 結(jié)果見1。

　　肝臟SOD活性：與空白對照組相比，模型對照組SOD活性明顯降低(P<0.05);與模型對照組相比，百消丹組、柴紅丸高、中劑量組SOD活性顯著升高(P<0.01)，柴紅丸低劑量組SOD含量也有所升高但不具有統(tǒng)計學差異(P>0.05);與百消丹組相比，柴紅丸低劑量組SOD活性顯著降低(P<0.05)。

　　皮膚SOD活性：與空白對照組相比，模型對照組SOD含量明顯降低(P<0.05)，其余各組SOD含量均無顯著性統(tǒng)計學差異(P>0.05);與模型對照組相比，百消丹組、柴紅丸高、中、低劑量組SOD含量顯著升高(P<0.01)。與百消丹組相比，模型對照組SOD含量顯著降低(P<0.01)，其余各組均無顯著性統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

　　柴紅丸高、中、低劑量組兩兩比較，柴紅丸高、中、低劑量組小鼠肝臟、皮膚的SOD數(shù)值雖有不同但均無顯著性差異，也無明顯量效關系。

　　注：與空白對照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對照組比較#P<0.05，

　　##P<0.01;與百消丹組相比☆P<0.05，☆☆P<0.01。

　　2.2 柴紅丸對小鼠MDA含量的影響 結(jié)果表2。

　　肝臟中MDA含量：與空白對照組相比，模型對照組MDA含量升高并具有顯著性統(tǒng)計學差異(P<0.01);與模型對照組相比，百消丹組、柴紅丸高、中、低劑量組MDA含量顯著降低且具有顯著性統(tǒng)計學差異(P<0.01);與百消丹組相比，模型對照組MDA含量顯著升高，柴紅丸各給藥組無顯著性統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

　　皮膚中MDA含量：與空白對照組相比，模型對照組MDA含量升高且具有顯著性差異(P<0.01);與模型對照組相比，百消丹組、柴紅丸高、中、低劑量組MDA含量都降低且具有顯著性統(tǒng)計學差異(P<0.01);與百消丹組相比，柴紅丸高、中、低劑量組均顯著降低皮膚中MDA含量(P<0.01)。

　　柴紅丸高、中、低劑量組兩兩比較，柴紅丸高、中、低劑量組小鼠肝臟、皮膚的MDA數(shù)值雖有不同但均無明顯差異，也無明顯量效關系。

　　3. 討論

　　黃褐斑是臨床常見的難治性皮膚病之一，其發(fā)病原因和機制較為復雜，一般認為與內(nèi)分泌因素[4]、紫外線照射、精神神經(jīng)因素[5]、妊娠或口服避孕藥[6]及不良生活習慣等有關,最終病理上導致黑色素在皮下沉積而形成。實驗研究表明[7-10]氧自由基與皮膚黑色素的形成及色素沉著有關;正常情況下氧化與抗氧化酶系統(tǒng)保持著動態(tài)平衡，抗氧化劑SOD能有效清除多余超氧自由基如MDA等，使其形成減少，從而推斷其阻止了黃褐斑的產(chǎn)生。因此，本文采用黃體酮注射液(孕激素)攻擊合并紫外光照射雌性小鼠的方法，復制黃褐斑實驗動物模型。從實驗結(jié)果來看，模型組實驗動物的肝臟和皮膚SOD、MDA含量均顯著升高，且與空白對照組相比具有顯著性統(tǒng)計學差異(有P<0.01或P<0.05)，說明動物造模是成功的，這與文獻報道[11，12]相一致。給藥后實驗動物肝臟和皮膚中SOD活性均明顯增高、MDA含量明顯降低，說明柴紅丸能提高黃褐斑模型小鼠機體SOD活性，清除多余氧自由基，從而可能對黃褐斑起到治療作用，同時我們用現(xiàn)在臨床用于治療黃褐斑較為有效的百消丹做比較，其差異有顯著性意義。

　　黃褐斑祖國醫(yī)學屬于“黧黑斑”“面塵”等范疇，是臨床的常見病、多發(fā)病，《外科正宗·卷四》記載“黧黑斑者，水虧不能制火，血弱不能華肉，以致火燥結(jié)成斑黑，色枯不澤。” 《醫(yī)宗金鑒?外科心法要訣·卷六十三》記載“憂思抑郁，血弱不華，火燥結(jié)滯而生于面上，婦女多有之”;其主要的病因為情志不遂，肝郁氣滯，氣滯則血瘀，氣滯血瘀則生為斑。故黃褐斑的治療宜疏肝解郁、活血祛瘀為主。柴紅丸是在逍遙散的基礎上加減而成，是我院多年來應用于臨床的治療黃褐斑的有效協(xié)定處方，方中以紅丹參活血化瘀消斑為君藥，柴胡、薄荷疏肝理氣為臣，配合當歸尾、紅花、赤芍以加強活血化瘀，梔子疏肝理氣共為佐藥，蜂蜜補中緩急為使，諸藥合用，共同起到疏肝解郁、活血化瘀消斑的功效，使肝腎充足，氣通血活，則黑斑消除。通過我們的動物實驗證實柴紅丸能提高實驗動物機體SOD活性，清除多余氧自由基，這方面可能是其治療黃褐斑的主要現(xiàn)代藥理作用。

　　(作者單位：1.汕頭市皮膚性病防治院; 2.廣東省中醫(yī)研究所)